PCR 引物批量设计与特异性检查 v2.0.0b19 前端复刻 PrimerServer2 · 设计引擎为服务端 primer3-py / Primer3 官方算法工具中心

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输入：设计引物并检查特异性

选择特异性检查用的数据库（基因组 / cDNA）

Ctrl/Cmd+点击多选。完整模式会用这些库检查每对设计出的引物；仅设计不需要。

已选模板

已选数据库： 2 个数据库（基因组 / cDNA，用于特异性检查）

尚未选择模板。请在左侧粘贴序列后点击「设计引物」。

设计参数

扩增全长

引物位于片段头尾，产物为片段全长（忽略区域设置）

勾选后上方「数据库选择」会自动展开，已选库时将同时自动跑特异性检查（结果区显示「可能扩增子」表）。

区域类型

区域起点 / 长度 (bp)

起点长度

留空自动取默认值。目标区域需足够小以能容纳在产物长度内。

产物长度 (bp)

最小最大

勾选「扩增全长」时产物长度自动锁定为片段全长，此项忽略。

每个方向返回候选数

特异性检查参数（完整 / 仅特异性检查使用）

检查扩增子长度 (bp)

最小最大

最多检查引物对数（完整模式）

最小 Tm 差值：

(°C) 以内

3' 端严格匹配过滤：

是

否

获取扩增子序列：

是

否

通用参数

最终保留引物对数：

检查二聚体（多重 PCR 用）：

是

否

仅特异性检查 — 引物特异性检查

选择物种的基因组或 cDNA（CDS）库，检查正向 / 反向引物对是否会在这些库中产生非预期扩增子（BLAST 特异性）。

正向引物 (5'→3')

反向引物 (5'→3')

参考数据库（基因组 / cDNA）

Ctrl/Cmd+点击选择多个库（物种 × 基因组/cDNA）。

检查扩增子长度 (bp)

最小最大

3' 端验证

是（仅保留 3' 端完全匹配的命中）

否（允许少量错配）

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